目前甘薯病毒常用的检测方法有症状学诊断法、指示剂植物检测法、血清学检测法、分子生物学检测法和 siRNA 深度测序技术等。其中,诊断学检测和指示剂植物检测常在初步鉴定中使用,血清学检测法和PCR 检测技术是目前较为常用的检测方法。
1 症状学诊断法
该方法是根据甘薯叶片和薯块上出现的典型症状来初步判断甘薯是否感染病毒。症状是病毒病诊断的重要依据,但受甘薯品种、病毒种类、生育阶段、环境因素的影响。因此,症状检测只能作为一种辅助手段,还需结合其他方法。
2 生物学检测法
生物学检测法又称指示植物检测法,是将待鉴定病株叶片或其他组织的研磨汁液摩擦接种在指示植物上,或通过媒介昆虫传播,或采用嫁接的方法进行接种,指示植物显症后观察其症状表现,初步鉴定病毒种类。检测甘薯病毒时常用巴西牵牛作为指示植物。该方法简便易行、成本低,可直接用于结果观察。但部分甘薯病毒侵染巴西牵牛时表现出的症状相似,不能准确地区分病毒种类。
3 血清学检测法
以植物病毒中的蛋白质或核酸为抗原,通过抗原与对应的抗体之间能否发生特异性免疫反应来实现病毒种类的快速鉴定。该方法兴起于 20 世纪六七十年代,目前甘薯上常用的检测方法有酶联免疫吸附测定法 (ELISA) 和 硝 酸 纤 维 素 膜 - 酶 联 免 疫 吸 附 法
(NCM-ELISA)。
4 PCR 检测技术
依据甘薯病毒的基因组全长序列、卫星分子DNA、运动蛋白和衣壳蛋白序列设计的 PCR 引物已广泛应用于甘薯病毒的检测。与常规 PCR 检测技术相比,多重RT-PC 技术能够在一次反应中同时检测多种病毒,极大地缩短了反应时间,提高了检测效率。实时荧光定量 PCR (real-time fluorescent quantitative PCR) 技术是近几年发展起来的一种新型的核酸定性、定量技术,既有普通 PCR 灵敏、快速的特点,还可实时监测,已应用于多种植物病毒的检测。