1、消毒处理
选取生长健硕、茎尖饱满的甘薯植株,取顶芽2cm,用水冲洗2-3遍备用。于无菌环境中,将幼芽用75%的酒精浸泡30s后,再用2%的次氯酸溶液消毒5min,浸泡于无菌水中备用。在显微镜下剥离0.1~0.3mm(带1~2个叶原基)的茎尖分生组织作为外植体,接种到诱导培养基上,于 27±1℃、光强30001x、每天13h光照处理条件下培养,一周后统计染菌情况。
2、茎尖剥离与培养诱导
选取生长健硕、茎尖饱满的甘薯植株,取顶芽2cm,用水冲洗2-3遍备用。于无菌环境中,将幼芽用75%的酒精浸泡30s后,再用2%的次氯酸溶液消毒5min,浸泡于无菌水中备用。将茎尖置于显微镜下,用手术刀将茎段上可见叶片剥离,切取0.1~0.3mm的茎尖分生组织,接种到分化培养基(MS培养基+1.0mg/L 6BA+0.5mg/L IAA)上。于 27±1℃、光强30001x、每天13h光照处理条件下培养,诱导不定芽的形成。 以MS培养基为基础,添加不同浓度比例的6-BA(0、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml)、NAA(0、0.125ml、0.25ml、0.5ml、0.75ml)和IAA(0、0.25ml、0.5ml、0.75ml、1.0ml),采用正交试验,20d观察茎尖诱导情况,转入MS培养基记录成苗率。
在分化培养基中培养20d,待茎尖膨大变绿后,将其转入MS培养基上培养成苗,30d后将小苗转入MS培养基中继代培养。
3、病毒检测及扩繁
利用甘薯病毒芯片快速检测方法进行脱毒苗病毒检测,选取脱毒成功长至5~7片叶的脱毒苗,在无菌环境中截取2cm左右茎段,每茎段须有2-3个节,转入MS培养基上,于温度 27±1℃、光强30001x、每天光照13h条件下培养,每30~40d扩繁一次。